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發(fā)布時間:2021-02-18

建立支原體培養(yǎng)基靈敏度檢査(變色單位試驗(yàn)法)及供試品檢查方法。除藥典推薦培養(yǎng)基外,亦可使用可支持支原體生長的其他培養(yǎng)基,但靈敏度必須符合要求。

 

培養(yǎng)基與菌種對應(yīng)關(guān)系如下表。

方法來源
 

《中國藥典》2015 年版 第四部 3301 支原體檢查法。

靈敏度檢查(變色單位試驗(yàn)法)
 

 

 

01

 

器具

(1)試管螺口旋蓋試管,利于培養(yǎng)時保持密閉;或者普通玻璃中試管,滅菌時使用硅膠塞,培養(yǎng)時換成橡膠塞;或者培養(yǎng)時使用無菌液體石蠟液封。

(2)新生牛血清。

(3)滅菌柜、生物安全柜、生化培養(yǎng)箱等。

 

 

 

02

 

培養(yǎng)基配制

(1)基礎(chǔ)培養(yǎng)基:按標(biāo)簽所示配制方法制備,分裝8mL/支,滅菌,待用。

(2)完全培養(yǎng)基:臨用前每支8mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入2mL新生牛血清。

 

注:半流體培養(yǎng)基在使用前應(yīng)煮沸10?15分鐘,冷卻至56°C左右,然后加入新生牛血清(培養(yǎng)基:血清為 8:2),并可酌情加入適量抑菌劑(青霉素等),充分搖勻?;A(chǔ)培養(yǎng)基,2-8℃可保存3個月。

 

 

03

 

菌液制備

將菌種接種于適宜的支原體培養(yǎng)基中,經(jīng)36C±1℃密閉培養(yǎng)至培養(yǎng)基變色, 盲傳兩代。
 
接種時建議做梯度稀釋,選取剛變色的培養(yǎng)物進(jìn)行下步試驗(yàn)。(培養(yǎng)時間太久,支原體容易死亡)

 

 

04

 

接種及培養(yǎng)

選取變色的新鮮培養(yǎng)物,接種至待檢培養(yǎng)基中,做10倍系列稀釋,肺炎支原體稀釋至 10-7~10-9,接種在支原體肉湯/半流體培養(yǎng)基內(nèi);口腔支原體稀釋至10-3~10-5,接種在精氨酸支原體肉湯/半流體培養(yǎng)基內(nèi)。每個稀釋度接種3支試管,置36°C±1°C密閉培養(yǎng)7?14天,觀察培養(yǎng)基變色結(jié)果。

 

 

 

05

 

結(jié)果判定

以接種后培養(yǎng)基管數(shù)的 2/3 以上呈現(xiàn)變色的最高稀釋度為該培養(yǎng)基的靈敏度。
   
靈敏度應(yīng)達(dá)到:
   
支原體肉湯/半流體培養(yǎng)基:肺炎支原體應(yīng)達(dá)到10-8;精氨酸支原體肉湯/半流體培養(yǎng)基:口腔支原體應(yīng)達(dá)到 10- 4。

 

 

 

陽性參考圖例(僅供參考)
 

                                        

 



 

原文鏈接支原體培養(yǎng)基的靈敏度檢査及供試品檢查(上)。


 

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